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核酸电泳凝胶的染色

核酸电泳凝胶的染色

凝胶的染色和观察 凝胶中核酸带的染色，常用***化乙锭法和银染法。前者与琼脂糖凝胶的染色方法相同。

银染法的灵敏度较高，可如下操作:

(1) 将凝胶置固定液(10%乙醇，0.5%冰醋酸)中固定10分钟;

(2) 双蒸水洗1-2次;

(3) 置0.01mol/L AgNO3溶液中，室温反应15-30分钟;

(4) 充分水洗;

(5) 置NaOH-甲醛混合液(200ml 3%NaOH，含1ml甲醛)中反应至条带显色清晰，本底适宜;

(6) 用5%冰醋酸终止反应。

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核酸电泳技术介绍

核酸电泳技术介绍

凝胶电泳分离核酸的基本原理凝胶电泳是分子生物学中鉴定、量化和纯化核酸的常用实验技术。 因其速度、简便性和通用性，该方法广泛应用于核酸的分离和分析。 采用凝胶电泳法，可在几分钟到数小时内分离出约0.1 - 25 kbp范围内的核酸，且可高纯、***地从凝胶中回收分离的核酸。

该项技术主要，在大小、电荷和结构的基础上，将电场施加于带电分子混合物上并引起迁移。 中性至碱性pH值(图1A)范围内，核酸中核苷酸骨架上的磷酸基团带负电。 因此，每个核苷酸携带一个净负电荷，即，一个核酸分子的总电荷与核苷酸的总数或它的质量成正比。 换言之，DNA或RNA分子的荷质比是恒定的。 因此，它们在凝胶电泳中的迁移率主要取决于其大小（结构可比较时）（详细了解 核酸结构如何影响迁移）。 因此，当受到电场作用时，核酸从负极（阴极）向正极（阳极）迁移，较短的碎片比较长的碎片移动得更快，导致基于尺寸的分离。

DNA电泳原理

DNA电泳原理

生物大分子在一定pH条件下，通常带电荷，将其置于电场中，会以一定的速度向与其电荷性质相反的电极迁移，迁移速度称电泳速率。

电泳速率与电场强度、分子所带的净电荷数成正比，与分子与介质的摩擦系数成反比。 摩擦系数与分子的大小、构型及介质的粘度有关。

在生理条件下，DNA分子糖-磷酸骨架中的磷酸基团呈离子化状态，故DNA实际上呈多聚阴离子状态，在电场中向 正极方向迁移。

糖-磷酸骨架在结构上重复，故等量的双链DNA几乎带等量的净电荷。

如电场强度一定、电泳介质相同，电泳速率就取决于核酸分子的大小和构型。 构型相似的分子:分子量越大、迁移越慢。