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DNA电泳

DNA电泳常见问题分析及解决方案

DNA条带模糊：1，DNA降解避免核酸酶污染；2，电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液；3，所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力；4， DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量；5，DNA样含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐；6，有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白；7，DNA变性电泳前勿加热，用20mM N***缓冲液稀释DNA

不规则DNA条带迁移：1， 对于λ/Hind III片段cos位点复性电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟；2，电泳条件不合适电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液；3，DNA变性以20mM N*** Buffer稀释DNA，电泳前勿加热

带弱或无DNA条带：1，DNA的上样量不够增加DNA的上样量；聚酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高，上样量可适当降低；2， DNA降解避免DNA的核酸酶污染；3，DNA走出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度；4，对于EB染色的DNA，所用光源不合适应用短波长（254nm）的紫外光源

DNA带缺失：1，小DNA带走出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度；2，分子大小相近的DNA带不易分辨增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度；3， DNA 变性电泳前请勿高温加热DNA链，以20mM N*** Buffer稀释DNA；4，DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析

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转印电泳

转印电泳AG与LG反应的特点：特异性、比例性、可逆性

1，特异性：由抗原决定簇和LG分子的超变区之间空间结构的互补性确定的。

2，比例性：抗原与LG发生反应需遵循一定的量比关系。

3，可逆性：抗原LG结合形成复合物后，在一定条件下又可解离***为抗原与LG的特性。

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蛋白电泳

蛋白电泳

我们通常把“蛋白电泳”俗称为跑胶，如果按照这个字面意思来理解的话就是把蛋白质放在胶上跑，为啥要让蛋白质在胶上跑呢？我们提到的蛋白是总蛋白，也就是说细胞里所有（理论上）蛋白都在里头了，但是我们要检测的只是其中的一两种，所以我们得想办法把各种蛋白质分离开，借助的方法就是跑胶。与核酸电泳一样，蛋白质电泳也需要marker和loading buffer。与核酸电泳不一样的是，蛋白电泳（做WB时）的marker本身就是带有颜色的，在电泳过程中，我们可以清楚地看到marker上的每一个条带的位置，而核酸电泳的过程中我们是看不到marker的每一条带的，只有把胶经过核酸染料染色后，并且在紫外光下我们才能看到marker的条带。

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