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发布时间:2020-06-01 04:39:22
琼脂糖水平电泳槽实验操作
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1. 根据电泳需要,配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。
注意:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。
2. 根据制胶量及凝胶浓度,在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中,加入准确称量的琼脂糖粉。
注意:总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。
3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖
注意:必须保证琼脂糖充分完全溶解,转印电泳槽公司,否则,会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡,停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。
4.使溶液冷却至60℃左右,如需要可在此时加入EB溶液使其终浓度为0.5ug/ml,并充分混匀(EB为***品,不提倡使用)。注意:EB是一种致***物质。使用含有EB的溶液时,请戴用手套。EB在可见光下会分解。
5.将琼脂糖溶液倒入制胶托盘中,然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在5-8 mm 之间。
注意:不要产生气泡,溶液温度太高(gt;60℃),会使得水分
过分蒸发,改变凝胶离子浓度,影响电泳效果。
6.在室温下使胶凝固(大约30 分钟),然后放置于电泳槽中进行电泳。
注意:凝胶不立即使用时,用保鲜膜将凝胶包好在4℃下保存,转印电泳槽厂家,或者放在制胶的缓冲液中,一般可保存2~5 天。
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制胶
将玻璃板洗净晾干,将厚板粘有边条的一侧与薄板重叠(薄板向外),放入制胶框内(如果放置困难可选择先放厚板再放薄板要求2块玻璃板底面对齐),将制胶夹胶框的卡锁转向外侧,转印电泳槽,将玻璃板固定。
用手捏紧制胶架上的固定夹,将整个制胶框置于制胶架上,松开固定夹,令卡块压住厚玻璃板,使玻璃板底面贴紧制胶架底部的密封垫。
向凝胶腔内缓慢注入配制好的聚丙烯酰胺凝胶(如灌制梯度凝胶需使用梯度混合器),先灌注分离胶,待分离胶凝固后,再灌浓缩胶。 浓缩胶灌满后,插入样品梳,待30至45分钟凝胶完全聚合后,制胶完成。
核酸电泳技术介绍
凝胶电泳分离核酸的基本原理凝胶电泳是分子生物学中鉴定、量化和纯化核酸的常用实验技术。 因其速度、简便性和通用性,该方法广泛应用于核酸的分离和分析。 采用凝胶电泳法,可在几分钟到数小时内分离出约0.1 - 25 kbp范围内的核酸,且可高纯、***地从凝胶中回收分离的核酸。
该项技术主要,在大小、电荷和结构的基础上,将电场施加于带电分子混合物上并引起迁移。 中性至碱性pH值(图1A)范围内,核酸中核苷酸骨架上的磷酸基团带负电。 因此,每个核苷酸携带一个净负电荷,转印电泳槽哪家好,即,一个核酸分子的总电荷与核苷酸的总数或它的质量成正比。 换言之,DNA或RNA分子的荷质比是恒定的。 因此,它们在凝胶电泳中的迁移率主要取决于其大小(结构可比较时)(详细了解 核酸结构如何影响迁移)。 因此,当受到电场作用时,核酸从负极(阴极)向正极(阳极)迁移,较短的碎片比较长的碎片移动得更快,导致基于尺寸的分离。
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