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发布时间:2020-06-23 05:29:28
电泳技术与病毒
北京龙方科技为您提供信息如下,希望能对您有所帮助! 龙方电泳 伴您成功!
不同大小的蛋白质和核酸可以通过聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶电泳分离开来。在多数电泳技术中,每一种蛋白质或者核酸会形成一个条带。电泳技术的原理在于不同分子量的分子在凝胶中移动速率不同。将大小未知的蛋白质或者核酸分子在凝胶中的位置与相同凝胶中大小已知的分子比较,就能估计未知分子的大小。SDS-PAGE是在聚丙烯酰胺凝胶中在SDS去污剂存在情况下屏蔽掉蛋白质带电不同,从而估计蛋白质分子量。
复杂的病毒成分可以按照双向电泳进行分离,即先按照蛋白质等电点进行分离(等电聚焦电泳),再依据蛋白质分子量进行第二向的分离(SDS-PAGE)。
核酸或者蛋白质经过电泳分离的谱型可以通过将其从凝胶上转移(印迹)到一层固相膜上。如果转移的是DNA,就叫sourthern印迹技术,电泳槽厂商,用以纪念它的发明者Edwin Southern;如果是RNA分子,就叫Nouthern blot,如果是蛋白质分子就是Western Blot。
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一、操作步骤
1、首先将电泳槽内的凝胶转印夹及转印绵清洗干净备用,将转印膜放在缓冲液中浸泡。
2、打开转印夹,黑色一侧放在桌面上,将转印绵铺在透明的转印夹上,在转印绵上放上一张同样大小的滤纸,然后将经过电泳后的凝胶平铺在滤纸上,再将转印膜平铺在凝胶上,注意在凝胶和转印膜之间不能有气泡,然后在转印膜上放上一张同样大小的滤纸,之后再铺上另外一张转印绵,形成一个“三明治”结构(要保证转印绵、凝胶、滤纸和转印膜的大小尺寸一样),之后将转印夹合拢,用锁具将转印夹扣住,对另一个转印夹也做出同样的操作。
3. 将合拢后的转印夹垂直放入转印模块中,注意颜色的区分,转移夹板的黑色部分朝向转印模块黑色的一方,一定不能放反。
4. 将组装好的转印模块移入电泳槽壳内,倒入转移缓冲液,缓冲液应没过凝胶。
5. 选择合适的电泳电源并设好参数开始电泳,电泳结束后取
出转印膜即可,转印膜可使用真空干燥器进行干燥处理,干燥后的转印膜可以长久保存。
三、注意事项
本产品内安装的铂金丝电极易断,使用中应小心操作,铂金丝不在保修范围之内,提醒客户清洗电泳槽时细致观察小心触碰。
DNA电泳常见问题分析及解决方案
DNA条带模糊:1,DNA降解避免核酸酶污染;2,电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,电泳槽生产厂家,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液;3,所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力;4, DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量;5,DNA样含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐;6,有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白;7,电泳槽批发,DNA变性电泳前勿加热,用20mM N***缓冲液稀释DNA
不规则DNA条带迁移:1, 对于λ/Hind III片段cos位点复性电泳前于65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟;2,电泳条件不合适电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液;3,DNA变性以20mM N*** Buffer稀释DNA,电泳前勿加热
带弱或无DNA条带:1,DNA的上样量不够增加DNA的上样量;聚酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高,上样量可适当降低;2, DNA降解避免DNA的核酸酶污染;3,DNA走出凝胶缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度;4,对于EB染色的DNA,所用光源不合适应用短波长(254nm)的紫外光源
DNA带缺失:1,小DNA带走出凝胶缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度;2,电泳槽,分子大小相近的DNA带不易分辨增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度;3, DNA 变性电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM N*** Buffer稀释DNA;4,DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析
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